一、预期用途
免疫组织化学染色， 配合常规鼠来源一抗的浓缩型或即用型二抗使用。
二、样本要求
新鲜活检或外科样本组织，甲醛固定， 固定时间 8-24 小时要求取材、脱水、石蜡包埋并制成蜡块。
三、检验方法
- 人体组织样本先经甲醛固定。
- 固定后的组织经过脱水等一系列操作制备成蜡块。
- 用切片机把组织蜡块切成切片。
- 手工法/自动组化仪免疫组化实验。
常规手工法推荐步骤如下：
- 4.1将需要进行实验的组织切片取出， 插入玻片架上后放入 60-65℃的烤箱中， 烤片 1-1.5h。
- 4.2将切片置于以下染色缸中梯度反应：
| 二甲苯 |
10分钟×2次 |
| 二甲苯 |
5分钟 |
| 无水乙醇 |
5分钟×2次 |
| 95%乙醇 |
5分钟 |
| 85%乙醇 |
5分钟 |
| PBST 清洗 |
3分钟×3次 |
- 4.3抗原修复：方法请参考采购的一抗说明书，或采用常规高压、微波、酶修复等
- 4.4根据组织大小直接滴加内源性过氧化物酶阻断剂到组织上，直至完全覆盖组织即可，通常为 50-100uL。室温15分钟，PBST清洗3分钟×3次。
备注：此步骤通常在水浴法、酶法等温和抗原修复后加入。或者组织本身含有较多内源性过氧化物酶中加入。
- 4.5根据组织大小滴加一抗到组织上，直至完全覆盖组织即可， 通常为50-100uL 。湿盒室温孵育30-60 分钟。 PBST清洗3分钟×3次。
备注：一抗的最佳反应时间因制造商不同可能略有差异
- 4.6根据组织大小滴加增强剂到组织上，直至完全覆盖组织即可，通常为50-100uL。室温20分钟，PBST 清洗3分钟×3次。
备注：
1）本步骤通常在自动组化仪中加入，手工法中增强剂可以根据显色效果自行选择是否加入
2）增强剂可增强小鼠来源一抗信号 1-10 倍
- 根据组织大小滴加 HRP 标记的二抗到组织上，通常为 100uL，直至完全覆盖组织。室温 30 分钟
备注：二抗的最佳反应时间因制造商不同可能略有差异，推荐配合Biodragon通用型病理二抗使用，货号 BDAA0167，Polymer HRP Goat Anti Mouse/Rabbit IgG(H+L),Ready to Use
- 加入与 HRP 适配的 DAB 或其他显色系统
- 自来水冲洗终止显色，加入苏木素溶液中复染；分化、冲洗反蓝。
- 酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片后阅片。
四、产品性能指标
- 符合性：阳性对照结果为阳性，阳性着色的定位应准确，无背景着色；空白对照和阴性对照染色结果为阴性。
- 批内重复性：同一组织来源的组织切片染色的强度和定位无明显差异。
- 批间重复性：不同批号试剂对同一组织来源的组织片染色的强度和定位无明显差异。
五、注意事项
- 本品仅用于科研，不做其他用途。
- 需专业人员使用。
- 应用适当防护措施，避免试剂同皮肤和眼睛接触。
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