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常见问题
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Q1:
假病毒的浓度怎么看,给了多少?
我们有滴度的定义,具体滴度请查看管壁标注.
我们假病毒的滴度定义方式为:使用仪器读数(酶联免疫荧光斑点分析仪,CTL,S6 Universal),以读数为700时(可以表示为仪器检测的范围内700个细胞有荧光),当前假病毒稀释倍数为该批次产品的滴度值/2。
示例,管壁上标注的病毒参考滴度1000=假病毒的稀释倍数(500倍)x2
Q2:
HPV16,18型假病毒,用病毒裂解液裂解后,能不能检测出E6,E7抗原?
没有E6 和E7
Q3:
我们的HPV的假病毒,能否感染hela细胞?
我们没有实验数据,所以也不确定。
一般HPV假病毒的感染实验都是用的293细胞,而且普通的293细胞效果可能都不行,必须是293FT或者293TT
Q4:
准备用HPV假病毒做中和实验,一般接种疫苗后,采集的人的血清大概稀释多少倍后进行中和实验,有没有测试过大概区间?
不同的疫苗和样品都不一样,一般都是需要先做梯度实验,可以先做100/1000/10000 三个梯度看看效果,再进行进一步的优化
Q5:
假病毒收毒是否只取细胞上清,是否需要对细胞进行裂解
大致流程:转染--去上清-裂解-取上清
Q6:
为什么没有荧光素酶Luciferase的假病毒
因为gfp的足够灵敏了,而且gfp的成本更低;Luciferase的假病毒,使用起来成本很高,还需要底物
Q7:
有没有荧光素酶Luciferase HPV假病毒
没有
Q8:
只能用于L1实验,还是可以同时进行L1和L2的实验
假病毒表面同时有L1和L2蛋白,可以进行L1的相关中和实验研究,也可以进行L2的相关中和实验研究。
Q9:
针对GFP假病毒的中和实验,可以最后破膜染GFP做流式检测么
流式检测也可,只要可以检测GFP的量就行,这个量和假病毒侵染正比。
Q10:
中和实验中,72h后检测中间需要换液吗?培养基变黄是否影响细胞的状态?
72h后检测,中间不需要换液。适当变黄是正常的,不会影响细胞状态。同时也要注意,要求刚开始的接种细胞数不能太多,最好是按照我们建议的细胞数量接种
Q11:
HPV16 、HPV 18的GFP序列可以提供吗
GFP是常规的,但是经过密码子优化,具体序列不方便对外提供
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